細胞培養(yǎng)過程中遇到的常見問題及解決的辦法:
1.培養(yǎng)液pH值變化太快:
(1)CO2張力不對;培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊;NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足;培養(yǎng)液中鹽濃度不正確。細菌、酵母或真菌污染。按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度,
2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應(yīng)CO2濃度為5%到10%。
(2)改用不依賴CO2培養(yǎng)液。松開瓶蓋1/4圈。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液,在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)
改用Hank’s鹽配制的培養(yǎng)液。丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。
2. 培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀,但pH值不變:
用洗滌劑清洗后殘留磷酸鹽將培養(yǎng)基成分沉淀下來。冰凍保存培養(yǎng)液。
用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿,然后除菌。
將培養(yǎng)液加熱到37℃,搖動使其溶解如沉淀仍然存在,丟棄培養(yǎng)液。
3. 培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀,同時pH 發(fā)生變化:
細菌或真菌污染 // 丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。